SMRT sekvenciranje temelji se na sekvenciranju sintezom koja je pri ruci. DNA je sintetiziran u nultom načinu vala-vodilica (ZMWs) - mala dobro kao posude s hvatanje alata koji se nalazi na dnu komore. Sekvenciranje se vrši upotrebom nemodificirane polimeraze (pričvršćene na dno ZMW) i fluorescentno obilježenih nukleotida koji slobodno teku u otopini. Bušotine su izgrađene na način da se detektira samo fluorescencija koja se pojavljuje na dnu izvora. Fluorescentna oznaka odvojila se od nukleotida nakon njegovog ugradnje u DNA niz, ostavljajući nepromijenjeno DNA nasukati. Prema Pacific Biosciences (PacBio), programeru SMRT tehnologije, ova metodologija omogućuje otkrivanje nukleotidnih modifikacija (poput metilacije citozina). To se događa primjedbom kinetike polimeraze. To će biti pri ruci za analizu od 20 000 nukleotida ili više, s prosječnom dužinom čitanja od 5 kilobaza. Godine 2015. Pacific Biosciences najavio je pokretanje novog instrumenta za sekvenciranje nazvan Sequel System, s 1 milijun ZMW-a u usporedbi sa 150 000 ZMW-a u instrumentu PacBio RS II. SMRT sekvenciranje naziva se slijedom "treće generacije" ili "dugo čitanje".
Slika 151A | Na temelju njihovih područja koja se preklapaju, moraju se sastaviti višestruko fragmentirane analize pridruživanja. | Suspencewl / CC0 | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mapping_Reads.png) iz Wikimedia Commons
Autor : Milos Pawlowski
Primjedbe
Objavi komentar