Sekvence pomoću reverzibilne kemije terminatora

U ovom slučaju se koriste reverzibilni dNTP-ovi vezani za terminator u cikličkoj operaciji koja uključuje ugradnju nukleotida, fluorescentno snimanje i cijepanje. Fluorescentno označen terminator se slika svaki dnTP, a zatim se cijepi kako bi se omogućila ugradnja sljedeće baze. Ovi nukleotidi su kemijski blokiran tako da je svaka ugradnja jedinstven događaj. Korak slike slijedi svaki korak ugradnje baze, a zatim se blokirana skupina kemijski uklanja kako bi se svaki sastav za sljedeću ugradnju pripremio pomoću DNA polimeraze. Ovaj redoslijed slijeda koraka nastavlja se kroz određeni broj ciklusa, što je određeno postavkama instrumenta koje definira korisnik. 3 'blokirne skupine izvorno su zamišljene ili kao enzimska ili kemijska preokret. Kemijska operacija je bila osnova za strojeve Solexa i Illumina. Određivanje reverzibilnom kemijom terminala može biti četverobojni ciklus kao što pokazuje Illumina / Solexa, ili jednobojni ciklus kako je pokazao Helicos BioSciences.Helicos BioSciences koristio je "virtualne terminatore", koji su deblokirani terminatori s drugim nukleozidnim analogom koji djeluju kao inhibitor. Ovi terminatori imaju odgovarajuće modifikacije za završavanje ili inhibiranje skupina tako da se DNA sintaza prekida nakon jednostruke adicije baze.

Slika 155A | PacBio SMRT tehnologija i Oxford Nanopore mogu se koristiti nepromijenjeni DNA za suočavanje sa metilacijom. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) iz Wikimedia Commons

Autor : Yavor Mendel

Reference:

Tehnike molekularne biologije I

Alati molekularne biologije III