Sekvenciranje masenom spektrometrijom

Masena spektrometrija može se koristiti za određivanje DNA sekvenci. Laserskom desorpcijskom ionizacijskom ionizacijskom masom spektrometrije tijekom leta ili MALDI-TOF MS posebno je istražena alternativna operacija gel electrophoresis za vizualizaciju DNA fragmenata. Ovom operacijom fragmenti DNA nastali reakcijama sekvenciranja lančanog prekida uspoređuju se po masi, a ne po veličini. Masa svakog nukleotida nije slična ostalim i ta se razlika utvrđuje masenom spektrometrijom. Mutacije pojedinačnih nukleotida u fragmentu mogu se lakše detektirati pomoću MS nego samim gel electrophoresis. MALDI-TOF MS može se lakše suočiti s razlikama između RNA fragmente, tako da istraživači mogu neizravno povezati DNA s metodama utemeljenim na MS-u, pretvarajući ih prvo u RNA .

Veća rezolucija fragmenata DNA dopuštenih metodama utemeljenim na MS-u od posebnog je interesa za istraživače forenzičke znanosti, jer bi oni željeli razlikovati jedno-nukleotidne polimorfizme u ljudskim uzorcima DNA kako bi otkrili pojedince. Ovi su uzorci vrlo degradirani, pa forenzički istraživači često preferiraju mitohondrijski DNA zbog njegove veće stabilnosti i primjene u loze. Metode sekvenciranja utemeljene na MS-u korištene su za usporedbu sekvenci ljudskog mitohondrija DNA iz uzoraka u bazi podataka Federalnog istražnog biroa i kostiju pronađenih u masovnim grobnicama vojnika Prvog svjetskog rata.

Slika 153A | Razdvajanje TAGGCT predloška s IonTorrent, PacBioRS i GridION | Philippe Hupé / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:From_second_to_fourth-generation_sequencing,_illustration_on_TAGGCT_template.svg) iz Wikimedia Commons

Slika 153A | Razdvajanje TAGGCT predloška s IonTorrent, PacBioRS i GridION | Philippe Hupé / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:From_second_to_fourth-generation_sequencing,_illustration_on_TAGGCT_template.svg) iz Wikimedia Commons

Autor : Milos Pawlowski

Reference:

Tehnike molekularne biologije I

Alati molekularne biologije II

Primjedbe