U prvom koraku ciklusa pročišćavanja Strep-tag stanični lizat koji sadrži Strep-tag fuzijski protein primjenjuje se na stupac s imobiliziranim Strep-Taktinom (korak 1). Nakon što se označeni protein posebno veže na Strep-Tactin, kratkim korakom pranja fiziološkim puferom (npr. PBS) uklanja se sve druge domaćinske proteine (korak 2). To se događa zbog njegove izuzetno niske tendencije da se posebno ne vežu proteini. Potom se pročišćeni Strep-tag fuzijski protein nježno eluira s niskom koncentracijom desthiobiotina, što se posebno natječe za biotin džep za vezanje (korak 3). Da bi se regenerirala kolona, deshiobiotin se uklanja primjenom otopine koja sadrži HABA (žuto azo-boja). Uklanjanje desthiobiotina naznačeno je promjenom boje s žuto-narančaste u crvenu (korak 4 + 5). U osnovi, otopina HABA se ispere malom volumenom tekućeg pufera, što neizbježno čini kolonu spremnom za upotrebu za sljedeće pročišćavanje trčanje.
Slika 273A | Tanjur s hrpom koja se sastoji od vrha od težine, papirnatih ručnika, membrane nitroceluloze ili najlona, gela, otopine soli i staklene ploče. | Thomasione / Public domain | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aufbau_Southern-Blot.jpg) from Wikimedia Commons
Autor : Yavor Mendel
Primjedbe
Objavi komentar